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丙酮是毒性蠻強的化學物質(zhì)，而且可由皮膚或呼吸道被吸收。丙酮可經(jīng)呼吸道、消化道和皮膚吸收。經(jīng)皮膚吸收緩慢，量少，主要是駝過前兩個途徑。由于丙酮的水溶性強，它易溶解和吸收入血液中，很快分布于全身。丙酮屬微毒類，其毒性主要是對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的麻醉作用?；魵鈱φ衬び兄械瘸潭鹊拇碳ぷ饔?。丙酮對皮膚無致敏作用，但有輕度刺激作用。吸信蒸氣急性中毒后主要表現(xiàn)為不同程度的麻醉狀態(tài)。最初出現(xiàn)管乏力、惡心、頭痛、頭暈、容易激動。嚴重時可出現(xiàn)嘔吐、氣急、痙攣以及昏迷。液體能刺激眼睛。吞服反能刺激消化系統(tǒng)，產(chǎn)生麻醉與錯迷等癥狀

CuZn37由63%的銅和37%的鋅組成。該產(chǎn)品具有與銅相當?shù)牧己脵C械性能和腐蝕行為。低電導率和出色的抗彎曲性能使其成為加熱應用的首選。此外，黃銅裸線適用于材料的放電去除(電火花腐蝕)。銅鋅合金線有各種絕緣和自粘合漆包線以及裸線或李茲線。特征非常好的機械性能卓越的抗彎曲性能低電導率應用程序電阻絲供暖應用電火花腐蝕吉他琴弦裝飾/織物其他人

CuZn37黃銅材料名稱：銅鋅合金(黃銅)牌號：CuZn37代號：2.0321標準：DIN 17660-1974●CuZn37化學成分：銅 Cu：62.0~64.0鋅 Zn：余量鉛 Pb：≤0.1鋁 Al：≤0.03鐵 Fe：≤0.1錳 Mn：≤0.1鎳 Ni：≤0.3銻 Sb：≤0.01錫 Sn：≤0.1雜質(zhì)總和(除Ni、Pb外)：≤0.5

CuZn37是由63%的銅和37%的鋅組成的銅鋅合金，即平時說的黃銅中的一種，很多人認為CuZn37的成分是銅鋅三七開，其實是誤解。

cuzn37黃銅材料名稱：銅鋅合金(黃銅) 牌號：cuzn37 代號：2.0321 標準：din 17660-1974 ●cuzn37化學成分：銅 cu：62.0~64.0 鋅 zn：余量鉛 pb：≤0.1 鋁 al：≤0.03 鐵 fe：≤0.1 錳 mn：≤0.1 鎳 ni：≤0.3 銻 sb：≤0.01 錫 sn：≤0.1 雜質(zhì)總和(除ni、pb外)：≤0.5 注：din 17660已于1983年修訂過，編號為din 17660-1983，因尚未搜集到，故仍按din 17660-1974給出加工黃銅化學成分。

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【丙酮氰醇】是【劇毒品】，是【第六類?；贰?。【?；贩诸悺康谝活悾罕ㄆ罚ㄆ分冈谕饨缱饔孟?如受熱、摩擦、撞擊等)能發(fā)生劇烈的化學反應，瞬間產(chǎn)生大量的氣體和熱量，使周圍的壓力急劇上升，發(fā)生爆炸，對周圍環(huán)境、設備、人員造成破壞和傷害的物品。第二類：壓縮氣體和液化氣體，指壓縮的、液化的或加壓溶解的氣體。這類物品當受熱、撞擊或強烈震動時，容器內(nèi)壓力急劇增大，致使容器破裂，物質(zhì)泄漏、爆炸等第三類：易燃液體，本類物質(zhì)在常溫下易揮發(fā)，其蒸氣與空氣混合能形成爆炸性混合物。第四類：易燃固體、自燃物品和遇濕易燃物品，這類物品易于引起火災。第五類：氧化劑和有機過氧化物，這類物品具有強氧化性，易引起燃燒、爆炸。第六類：毒害品，指進入人(動物)肌體后，累積達到一定的量能與體液和組織發(fā)生生物化學作用或生物物理作用，擾亂或破壞肌體的正常生理功能，引起暫時或持久性的病理改變，甚至危及生命的物品。如各種氰化物、砷化物、化學農(nóng)藥等等。第七類：放射性物品，它屬于危險化學品，但不屬于《危險化學品安全管理條例》的管理范圍，國家還另外有專門的“條例”來管理。第八類：腐蝕品，指能灼傷人體組織并對金屬等物品造成損傷的固體或液體。

你好~銅皮是指顏色，鐵骨是：你敲擊三七這個藥材在地面或桌上，發(fā)出的音質(zhì)就和金屬鐵器一樣，獅子頭是指三七表面的狀突起

銅皮：灰黃色的外皮鐵骨：質(zhì)地堅硬難折斷獅子頭：表面瘤狀凸起骨肉分離：切片時皮部與木部易分離

具有“銅皮,鐵骨,獅子頭”的藥材是田七（三七）。

三七銅皮鐵骨獅子頭是指三七的外形，銅皮是指三七的顏色像銅的顏色，鐵骨是指敲擊三七在地面或桌上，發(fā)出的音質(zhì)就和金屬鐵器一樣，獅子頭是指三七表面的形狀突起。三七的特征可用“乳包、釘頭、銅皮、鐵骨、菊花心”概括。“乳包”是指頂端及周圍的瘤狀突起物；“釘頭”是底部切斷支根的痕跡；“銅皮”是指灰黃色的外皮；“鐵骨”是指質(zhì)地堅硬難折斷；而“菊花”是形容斷面的放射紋理，具此五個特點者即為三七正品。擴展資料選購三七的注意事項：1、看三七的個頭。三七種植年限越長，個頭就越大，質(zhì)量越好。因此，三七的大小等級以每市斤有多少頭(個)為準，頭數(shù)越多，表明三七越小，頭數(shù)越少，則三七越大。購買三七時，在經(jīng)濟條件允許下，應以顆大、堅實、無枝爪的為佳。2、看三七的顏色。好的三七外觀為三七本色（土黃色）在加工過程中經(jīng)過清洗，表面較粗糙無任何附著物。打過蠟的三七，外觀多為灰白色，也有灰黑色，通常都較為光亮，有較多的附著物，這是由于三七打磨時添加了石蠟，滑石粉等物質(zhì)。參考資料來源：人民網(wǎng)-關于三七，這些知識你知道嗎？參考資料來源：百度百科-三七

銅排與銅排搭接面間隙的要求使用塞尺檢查，間隙不大于125分之一毫米最主要的要求，就是接觸緊密。為了實現(xiàn)這個要求，以下幾點是必須遵守的：　　1、搭接長度必須等于一個短邊長度；　　2、沖孔直徑與緊固螺栓實現(xiàn)一級緊密配合，不允許電焊、氣焊開孔，不允許開橢圓孔；　　3、搭接面必須采用同材質(zhì)，即銅與銅鍍錫搭接、銅鍍錫與鋁材搭接、鋁與鋁材搭接?！　?、搭接間隙檢查，使用專業(yè)塞尺，間隙不大于125分之一毫米，并且最后裝配時涂抹導電膏?！　?、緊固螺栓的數(shù)量和規(guī)格、緊固力矩，符合《安裝檢驗規(guī)程》的具體要求。

最主要的要求，就是接觸緊密。為了實現(xiàn)這個要求，以下幾點是必須遵守的：1、搭接長度必須等于一個短邊長度；2、沖孔直徑與緊固螺栓實現(xiàn)一級緊密配合，不允許電焊、氣焊開孔，不允許開橢圓孔；3、搭接面必須采用同材質(zhì)，即銅與銅鍍錫搭接、銅鍍錫與鋁材搭接、鋁與鋁材搭接。4、搭接間隙檢查，使用專業(yè)塞尺，間隙不大于125分之一毫米，并且最后裝配時涂抹導電膏。5、緊固螺栓的數(shù)量和規(guī)格、緊固力矩，符合《安裝檢驗規(guī)程》的具體要求。

最主要的要求，就是接觸緊密。為了實現(xiàn)這個要求，以下幾點是必須遵守：1、搭接長度必須等于一個短邊長度。2、沖孔直徑與緊固螺栓實現(xiàn)一級緊密配合，不允許電焊、氣焊開孔，不允許開橢圓孔。3、搭接面必須采用同材質(zhì)，即銅與銅鍍錫搭接、銅鍍錫與鋁材搭接、鋁與鋁材搭接。4、搭接間隙檢查，使用專業(yè)塞尺，間隙不大于125分之一毫米，并且最后裝配時涂抹導電膏。擴展資料：打孔常用鉆頭：鉆頭是鉆孔用的刀削工具，常用高速鋼制造，工作部分經(jīng)熱處理淬硬至62～65HRC。一般鉆頭由柄部、頸部及工作部分組成。1、柄部：是鉆頭的夾持部分，起傳遞動力的作用，柄部有直柄和錐柄兩種，直柄傳遞扭矩較小，一般用在直徑小于12mm的鉆頭；錐柄可傳遞較大扭矩（主要是靠柄的扁尾部分），用在直徑大于12mm的鉆頭。2、頸部：是砂輪磨削鉆頭時退刀用的，鉆頭的直徑大小等一般也刻在頸部。3、工作部分：它包括導向部分和切削部分。導向部分有兩條狹長、螺紋形狀的刃帶（棱邊亦即副切削刃）和螺旋槽。棱邊的作用是引導鉆頭和修光孔壁；兩條對稱螺旋槽的作用是排除切屑和輸送切削液（冷卻液）。切削部分結(jié)構(gòu)見掛圖與實物，它有兩條主切屑刃和一條柄刃。兩條主切屑刃之間通常為118°±2°，稱為頂角。橫刃的存在使銼削是軸向力增加。

回答的很好不過搭接長度你說的不對搭接長度是根據(jù)搭接面積算出來的，不一定要大于寬度假如：2根200*10 搭接，長度只需要100就夠。

HMGCoA合成酶是關鍵酶乙酰乙酸硫激酶存在于腎、心和腦，直接活化乙酰乙酸生成乙酰乙酰CoA，為酮體氧化中的關鍵酶之一。乙酰乙酰CoA硫解酶存在于酮體生成過程中，使2分子乙酰CoA縮合成乙酰乙酰CoA。乙酰乙酰CoA在HMGCOA合成酶的作用下與另一乙酰輔酶A生成HMGCOA，然后HMGCOA在其裂解酶的作用下生成乙酰乙酸，乙酰乙酸脫氫脫羧分別生成B-羥丁酸和丙酮，此為酮體生成過程。HMGCoA合成酶在肝細胞內(nèi)豐富，在其它組織極少，故而是合成關鍵酶。參加人衛(wèi)第七版生化129頁。

合成酮體的關鍵酶是HMG CoA合成酶。酮體的生成：以乙酰CoA為原料，在肝線粒體經(jīng)酶催化先縮合，后再裂解而生成體，除肝之外，腎也含有生成酮體的酮體系。酮體的合成過程可分三步進行。1、由兩分子乙酰CoA在硫解酶的作用下縮合生成乙酰乙酰CoA，同時釋放出一分子CoA-SH。2、乙酰乙酰CoA再與一分子乙酰CoA結(jié)合生成6個碳的3-羥甲基戊二酸單酰CoA（HMGCoA），并釋放出CoA-SH，此反應是由HMGCoA合成酶催化的，該酶在肝線粒體含量極高。3、乙酰乙酸被還原生成β-羥丁酸，該還原反應是由緊密結(jié)合在線粒體內(nèi)膜上的β-羥丁酸脫氫酶（此酶在肝中活性極高）催化，還原反應所需的氫由NADH提供。該反應速度取決于NADH／NAD+之比值。部分乙酰乙酸還可緩慢地自發(fā)脫羧，亦可經(jīng)乙酰乙酸脫羧酶催化脫羧生成酮。擴展資料：膽固醇和酮體的合成原料都是乙酰CoA ，2分子乙酰CoA由乙酰乙酰CoA硫解酶催化，生成乙酰乙酰CoA。后者在HMG CoA 合酶作用下生成HMG CoA（羥甲基戊二單酰CoA）。HMG CoA在HMG CoA裂解酶催化下經(jīng)多步反應生成酮體。HMG CoA在HMG 還原酶催化下經(jīng)多步反應生成膽固醇?？梢奌MG CoA合酶既參與酮體的合成，也參與膽固醇的合成。酮體的利用：酮體被氧化的關鍵是乙酰乙酸被激活為乙酰乙酸輔酶A，激活的途徑有兩種：1、在肝外組織細胞的線粒體內(nèi)，β－羥丁酸經(jīng)β－羥丁酸脫氫酶作用，被氧化生成乙酰乙酸，乙酰乙酸與琥珀酰CoA在β－酮脂酰CoA轉(zhuǎn)移酶（β-ketoacyl CoA transferase）（3-氧酰CoA轉(zhuǎn)移酶），即琥珀酰CoA；乙酰乙酸輔酶A轉(zhuǎn)移酶催化下，生成乙酰乙酰CoA，同時放出琥珀酸。2、另一途徑是在有HSCoA和ATP存在時，由乙酰乙酸硫激酶催化，使乙酰乙酸形成乙酰乙酰輔酶A，后者再經(jīng)硫解生成兩分子乙酰CoA。乙酰CoA進入三羧酸循環(huán)被徹底氧化。參考資料來源：百度百科-酮體參考資料來源：百度百科-脂代謝

你好！是甲羥戊二酰COA合成酶，也就是HMGCOA合成酶，兩個乙酰輔酶A在乙酰乙酸硫激酶的作用下生產(chǎn)乙酰乙酰輔酶A，后者在HMGCOA合成酶的作用下與另一乙酰輔酶A生成HMGCOA，然后HMGCOA在其裂解酶的作用下生成乙酰乙酸，乙酰乙酸脫氫脫羧分別生成B-羥丁酸和丙酮希望對你有所幫助，望采納。

70度白酒約100克；60度白酒約150克；50度白酒約200克；40度白酒約300克拓展資料：車輛駕駛?cè)藛T血液中的酒精含量大于或者等于20mg/100ml,小于80mg/100ml屬于飲酒后駕車;醉酒駕車是指車輛駕駛?cè)藛T血液中的酒精含量大于或者等于80mg/100ml的駕駛行為。血液中的酒精含量大于或者等于80mg/100ml為醉酒駕車。如果發(fā)現(xiàn)駕駛員有飲酒嫌疑，交警可使用呼吸式酒精檢測儀現(xiàn)場檢驗，由檢測儀打印出結(jié)果，被檢人當場簽字。如被檢人拒絕簽字，只要有兩名交警在場，檢驗結(jié)果便可生效。酒后駕車扣12分，并處暫扣駕照6個月，罰款1000元至2000元.因飲酒后駕駛機動車被處罰，再次飲酒后駕駛機動車的，將處十日以下拘留，并處一千元以上二千元以下罰款，吊銷駕照。 70度白酒喝二兩八錢=醉酒狀態(tài) 60度白酒喝三兩=醉酒狀態(tài) 50度白酒喝四兩=醉酒狀態(tài) 40度白酒喝五兩=醉酒狀態(tài) 10度到20度黃酒或日本清酒喝1斤=醉酒狀態(tài) 12度到16度的葡萄酒喝1斤2兩=醉酒狀態(tài) 3度到5度的啤酒喝3瓶或6聽易拉罐=醉酒狀態(tài) 20mg/100ml大致相當于一杯啤酒；80mg/100ml,則相當于3兩低度白酒或者2瓶啤酒；100mg/100ml,大致相當于半斤低度白酒或者3瓶啤酒。落實到具體的白酒酒精度數(shù)，如果人體中每百毫升血液中含到100毫克酒精，不同的酒類的量化分別是：70度白酒約50克；60度白酒約75克；50度白酒約100克；40度白酒約150克，也就是一口杯的量；日本清酒約500克；紅酒約600克；啤酒約3瓶或者6個易拉罐。參考資料：搜狗百科：醉酒駕車

相當于300克低度白酒。血液酒精濃度80毫克也就是100毫升則相當于150克低度白酒，而喝一瓶啤酒百毫升血液酒精含量大約為40毫克也就是50毫升。乙醇（ethanol），有機化合物，分子式C2H6O，結(jié)構(gòu)簡式CH3CH2OH或C2H5OH，俗稱酒精，是最常見的一元醇。拓展資料乙醇（ethanol），有機化合物，分子式C2H6O，結(jié)構(gòu)簡式CH3CH2OH或C2H5OH，俗稱酒精，是最常見的一元醇。乙醇在常溫常壓下是一種易燃、易揮發(fā)的無色透明液體，低毒性，純液體不可直接飲用；具有特殊香味，并略帶刺激；微甘，并伴有刺激的辛辣滋味。易燃，其蒸氣能與空氣形成爆炸性混合物，能與水以任意比互溶。能與氯仿、乙醚、甲醇、丙酮和其他多數(shù)有機溶劑混溶，相對密度（d15.56）0.816。乙醇的用途很廣，可用乙醇制造醋酸、飲料、香精、染料、燃料等。醫(yī)療上也常用體積分數(shù)為70%~75%的乙醇作消毒劑等，在國防化工、醫(yī)療衛(wèi)生、食品工業(yè)、工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中都有廣泛的用途。乙醇與二甲醚（即甲醚）互為官能團異構(gòu)體。 2017年10月27日，世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機構(gòu)公布的致癌物清單初步整理參考，含酒精飲料中的乙醇在一類致癌物清單中。參考資料：乙醇

按公式：酒后血液酒精最高含量mg/100ml：【飲酒量（ml）×酒精含量（%）×114】÷體重（公斤）

喝250克46度的白酒酒精含量大概是多少

喝多少酒算酒駕呢?公安部開始嚴查酒后駕駛以來，不少司機朋友中了招。一、查酒駕依據(jù)的標準是：血液中酒精含量<20mg/100ml，不構(gòu)成飲酒駕車行為(不違法); 血液中酒精含量≥20mg/100ml，為酒后駕駛血液中酒精含量≥80mg/100ml，為醉酒駕駛這個標準相信很多朋友都知道，但具體喝多少酒就達到酒后或醉酒標準呢，是用酒精測試儀進行現(xiàn)場測定的，對著測試儀呼一口氣，酒精含量馬上就會顯示出來。如果達到醉酒或酒后標準，當事人可提出異議，可以安排抽血化驗血液中酒精含量，一般要第二天出結(jié)果。如果當事人從酒精測試儀沒有提出異議，測試結(jié)果可作為處罰依據(jù)。下面以常見的幾種酒作一個計算，二、到底喝多少酒算酒后： a、幾個數(shù)據(jù)： 1、酒精度酒的品種正常范圍取值啤酒 3.6-4.5% 4% 白酒 38-60% 40% 黃酒 10-16% 12% 紅酒 7-16% 10% 2、血液總量正常人體的血液總量大約占到人體體重的百分之六到百分之八，這是個質(zhì)量容積比。比如，一個體重六十公斤的人，他身體的血液有3600到4800ml。這里我們按65kg和7%計算，血液總量為4550ml，合45.5(100ml)。 b、計算方法：血液中酒精含量(mg/100ml)=酒中的酒精總量(mg)/血液量(100ml) (a)、啤酒(酒精度按4%計) 1、如果喝一杯啤酒(200ml)，約1瓶啤酒600ml的三分之一。這時酒精含量=200*0.04/45.5，結(jié)果是0.176mg/100ml，雖然不算酒后，但已經(jīng)接近酒后標準了。 2、如果喝一瓶啤酒(600ml)，這時酒精含量=600*0.04/45.5，結(jié)果是0.527mg/100ml，已經(jīng)是酒后了。 3、如果喝三瓶啤酒(1800ml)，這時酒精含量=1800*0.04/45.5，結(jié)果是1.58mg/100ml，已經(jīng)超過醉酒標準了(80mg/100ml)。 4、啤酒最多能喝909ml，就到了醉酒標準臨界值，相當600ml/瓶的啤酒1瓶半。 (b)、白酒(按40度計算) 1、如果喝1兩(50ml)白酒，酒精含量=50*0.4/45.5,結(jié)果是0.44mg/100ml，已經(jīng)是酒后駕駛了。 2、如果喝2兩(100ml)白酒，酒精含量=100*0.4/45.5,結(jié)果是0.88mg/100ml，已經(jīng)是醉酒駕駛了。 3、白酒最多能喝91ml，就到了醉酒標準臨界值，相當一兩八錢的白酒。 4、白酒最多能喝23ml，就到了酒后標準臨界值，相當半兩的白酒。 (c)、黃酒(按12度計算) 1、如果喝1兩(50ml)黃酒，酒精含量=50*0.12/45.5,結(jié)果是0.13mg/100ml，接近酒后標準了。 2、如果喝2兩(100ml)黃酒，酒精含量=100*0.12/45.5,結(jié)果是0.26mg/100ml，已經(jīng)是酒后駕駛了。 3、如果喝1斤(500ml)黃酒，酒精含量=500*0.12/45.5,結(jié)果是1.32mg/100ml，已經(jīng)是醉酒駕駛了。 4、黃酒最多能喝303ml，就到了醉酒標準臨界值，相當六兩的黃酒。 5、黃酒最多能喝76ml，就到了酒后標準臨界值，相當一兩半的黃酒。 (d)、紅酒(葡萄酒)(按10度計算) 1、如果喝1兩(50ml)紅酒，酒精含量=50*0.1/45.5,結(jié)果是0.11mg/100ml，問題不大。 2、如果喝2兩(100ml)紅酒，酒精含量=100*0.1/45.5,結(jié)果是0.22mg/100ml，已經(jīng)是酒后駕駛了。 3、如果喝1斤(500ml)紅酒，酒精含量=500*0.1/45.5,結(jié)果是1.1mg/100ml，已經(jīng)是醉酒駕駛了。 4、紅酒最多能喝364ml，就到了醉酒標準臨界值，相當七兩的紅酒。 5、紅酒最多能喝91ml，就到了酒后標準臨界值，相當二兩的紅酒。三、簡述喝酒后血液中酒精含量與人的體重、酒的度數(shù)高低、飲酒后休息的時間有關，與個體的酒量沒有任何關系。因此，不要認為你的酒量大，能喝十瓶啤酒或一斤白酒就不怕測酒精含量了。一般來說，體重大的人血液量也會增加，酒度數(shù)越高(白酒>黃酒>紅酒>啤酒)，就越容易達到酒后駕駛標準。另外，提醒大家注意：酒精在血液中分解不是很快，有可能前一天晚上喝醉了酒，第二天早上還會被測出酒駕出來。四、匯總(各種酒的臨界值) 酒后駕駛標準醉酒駕駛標準啤酒 230ml(約1杯半或半瓶) 920ml(一瓶半) 白酒 23ml(約半兩白酒) 92ml(約2兩白酒) 黃酒 76ml(約1兩半) 303(約六兩) 紅酒 91ml(約二兩) 364(七兩) 以上是喝多少酒算酒駕的介紹，最后請大家切記，千萬不要酒后開車。

1988年，魯岐等學者對三七中的氨基酸進行了分析測試，共測得16種氨基酸，其中7種為人體必必需氨基酸，總氨基酸的平均含量為7.73%。

一般來說人體必須的17種氨基酸，也較為重視氨基酸的定性測定一、氨基酸的一般顯色反應本節(jié)介紹三種顯色反應：茚三酮法、吲哚醌法和鄰苯二甲醛法。前二種是經(jīng)典的常用顯色法，后一種是近年來發(fā)展起來的熒光顯色法，具有靈敏度高的特點。1. 茚三酮法顯色方法有下列數(shù)種：①常用法：將點有樣品的層析或電泳完畢的濾紙充分除盡溶劑，用 5g/l 茚三酮無水丙酮溶液噴霧，充分吹干，置65℃烘箱中約30min（溫度不宜過高，避免空氣中氨，以免背景泛紅色），氨基酸斑點呈紫紅色。為了使各種氨基酸呈現(xiàn)不同顏色，可用下列方法：②用 0.4g 茚三酮，10g 酚和90g 正丁醇的混合液顯色。③用 1g/l 茚三酮無水丙酮溶液顯色完畢后，再用鹽酸蒸汽熏1min。④用 1g 茚三酮，600ml 無水乙醇，200ml 冰醋酸及80ml2,4,6-三甲基吡啶混合液80℃染色5～10min。為了使顯色穩(wěn)定，可用下列方法：⑤配制含醋酸鎘 2g 加蒸餾水200ml 及冰醋酸40ml 的貯存液。將上述貯存液加200ml丙酮及2g 茚三酮，即為顯色液。點有樣品的濾紙上浸有此顯色液后，放置于盛有一小杯濃硫酸的密閉玻璃容器中，25℃，18h，或較高溫度下適當縮短時間。背景色淺，氨基酸斑點也比較穩(wěn)定。⑥用含 2g/lcocl2(或cuso4)的4g/l 茚三酮異丙酮溶液顯色時，氨基酸斑點呈紅色，也可在茚三酮顯色后噴以含鈷、鎘或銅等無機離子的異丙醇溶液，斑點自藍紫色變成紅色。2．吲哚醌法（1）原理各種氨基酸與吲哚醌試劑能顯示不同顏色，因此可借此辯認氨基酸。氨對吲哚醌顯色沒有妨礙，但其靈敏度較茚三酮法稍差，顯色不穩(wěn)定，顏色只有在絕對干燥的環(huán)境中才能保存。（2）試劑①顯色劑：1g 吲哚醌溶于100ml 乙醇及10ml 冰醋酸中（若冰醋酸用量減少則靈敏度稍差）。②底色褪色劑：在 100ml 200g/l 碳酸鈉溶液中加入60g 硅酸鈉（na2sio3?9h2o）在水?。?0～70℃）中加熱攪拌直至完全溶解，待溶液比較清澈為止。在溶解過程中，有時硅酸鈉會結(jié)成凝膠，此時只需繼續(xù)攪拌即可溶解。配制時若硅酸鈉用量多則褪色較快，但背景容易變黃，硅酸鈉用得少（40g），雖裉色較慢，但背景較為潔白。顯色步驟層析或電泳后濾紙烘干后，仔細噴上或涂上顯色劑，用電吹風迅速吹干，待醋酸氣味不太刺鼻時移置100℃烘箱烘5～15min，直至顯色為止（溫度不要太高，以免引起減色）注意觀察所顯出的顏色，然后均勻地涂上底色褪色劑，紙的背景即由黃色變?yōu)榻{紅而后逐漸變淺，待黃色背景幾乎褪盡時，迅速用電吹風吹干，并隨時觀察顏色的變化。例如蘇氨酸在褪色前為淺紅帶褐色，褪色后則呈橙黃色或黃色：脯氨酸在褪色前為藍色，吹干時很快褪成無色。室溫較低時，底色褪色很慢，此時可將褪色劑加溫到30～40℃。溫度過高也不宜，因氨基酸斑點的褪色速度也同時加快，應該避免。其他顯色步驟：顯色劑為 1g 吲哚醌，1.3g 醋酸鋅溶解于70～80ml 熱異丙醇中，冷卻后加1ml 吡啶?；蛘?g 吲哚醌，1.5g 醋酸鋅溶解于95ml 熱異丙醇中，加3ml 水，冷卻后加1ml 冰醋酸。點有樣品的濾紙仔細噴以顯色劑后，80～85℃放置10min，背景可用水迅速浸洗去而不使氨基酸斑點退去由于吲哚醌試劑配制方法不同，對同一種氨基酸所顯顏色往往也有差異。3．鄰苯二甲醛法鄰苯二甲醛法是目前紙上層析、硅膠薄層層析熒光顯色氨基酸最靈敏的方法之一，也可用于氨基酸溶液定量，并推廣應用于乙內(nèi)酰苯硫脲氨基酸、多肽和蛋白質(zhì)的檢出和定量。根據(jù)文獻報道，氨基酸紙上層析靈敏度達0.5μmol，在硅膠薄層層析上為0.05～0.2μmol。這里介紹在紙上層析顯現(xiàn)氨基酸方法。（熒光胺是另一種常用的熒光試劑，由于熒光胺來源比較困難，這里未作介紹）（1）原理鄰苯二甲醛在 2-巰基乙醇存在下，在堿性溶液中與氨基酸作用產(chǎn)生熒光化合物，最適的激發(fā)光和發(fā)射光波長分別為340nm 和455nm。各種氨基酸顯現(xiàn)的熒光強度不同，其相對熒光強度由大到小大致順序如下：天門冬氨酸，異亮氨酸，甲硫氨酸，精氨酸，組氨酸，亮氨酸，絲氨酸，纈氨酸，谷氨酸，蘇氨酸，甘氨酸，色氨酸，丙氨酸，苯丙氨酸，賴氨酸，酪氨酸，nh3，脯氨酸和半胱氨酸。（2）試劑鄰苯二甲醛顯色液：取0.1g 鄰苯二甲醛，0.1mg 巰基乙醇，1ml 三乙胺，加丙酮+石油醚（60℃～90℃）（1+1）的混合溶劑至100ml。放置0.5h 后使用。顯色步驟將含有氨基酸樣品的濾紙浸入鄰苯二甲醛顯色液中 1min，冷風吹干，在溫度18℃以下，濕度50%～90%之間顯色0.5h，于紫外燈下觀察熒光點。說明在濾紙上顯現(xiàn)氨基酸時，鄰苯二甲醛濃度以 0.1%為宜。顯色時必須有一定的濕度，以便氨基酸溶解，提高分子碰撞機率，并使極性基團解離，促進反應趨于完全。濕度太低，顯不出熒光。溫度對顯現(xiàn)的熒光延時有顯著影響，溫度高熒光延時短，溫度低熒光延時長。二、個別氨基酸的顯色反應利用個別氨基酸與某些試劑具有特殊的顯色反應定性氨基酸?？蓱糜诩垖游龊图堧娪撅@色，也可單獨應用。方法很多，僅將常用的方法介紹如下：1．精氨酸的顯色——坂口（sakaguchi）反應(1)第一種方法試劑：①5g 尿素溶解于100ml0.1g/lα-萘酚乙醇中。使用前，每100ml 加約5g koh。②0.7ml 溴水溶解于100ml 5%naoh 中。顯色步驟：在點有樣品的濾紙上噴試劑①后，在空氣中吹幾分種，再噴試劑②。精氨酸或含精氨酸的多肽顯紅色。此試劑對含精氨酸的蛋白質(zhì)也適用。(2)第二種方法：試劑：①1g/l 8-羥基喹啉的丙酮溶液。②0.02ml 溴水溶解于100ml 0.5mol/lnaoh 溶液中。顯色步驟：將點有樣品的濾紙烘干后，噴上試劑①，吹干后，再噴試劑②。精氨酸或其他胍類物質(zhì)顯桔紅色。2．胱氨酸和半胱氨酸的顯色試劑：①1.5g 亞硝基鐵氰化鈉（na2fe(cn)5no2?5h2o）溶于5ml 2mol/l h2so 4 溶液中，加95ml 甲醇。此時會有沉淀產(chǎn)生，可保存一個月以上。使用時在每100ml 上述溶液中加10ml 28%氨水，過濾除去沉淀，清液僅能保持一天左右。②2g 氰化鈉溶于5ml 水中，然后加95ml 甲醇。此時有沉淀產(chǎn)生，使用時只需搖勻即可。顯色步驟：半胱氨酸的顯色：在濾紙上噴以試劑①的清液，5min 后半胱氨酸顯紅色。胱氨酸的顯色：先將濾紙浸入試劑②，迅速取出，稍等片刻再噴試劑甲的清液，5min 后胱氨酸顯紅色。也可以把試劑②配制的濃度增加一倍，在顯色前混和，再噴到濾紙上。3．甘氨酸的顯色試劑；0.1g 鄰苯二甲醛溶于100ml 77%乙醇中。顯色步驟：點有樣品的濾紙噴上試劑，甘氨酸顯墨綠色，在汞燈（365nm）下顯巧克力棕色。吲哚醌顯色后，再用此試劑仍有效。以甘氨酸為n 端的小肽也能顯色，但其n 端被保護后，以及其他氨基酸均不顯色。4．脯氨酸的顯色試劑：1g 吲哚醌和1.5g 醋酸鋅，1ml 醋酸，5ml 蒸餾水混和，再加入95ml 異丙醇。新鮮配制。顯色步驟：層析濾紙除盡溶劑，噴上以上試劑，80℃～85℃烘箱內(nèi)放置30min，脯氨酸顯藍色，再以30℃溫水漂洗除去多余的試劑后，背景為白色或淺黃色。也可剪下脯氨酸斑點，在試管中加入5ml 水飽和酚，在黑暗中洗脫15min，間歇振搖，于610nm 測定其吸光度。從已知標準曲線即可求得樣品內(nèi)脯氨酸含量，測定范圍5～20μg。5．絲氨酸和羥賴氨酸的顯色試劑：①0.035mol/l 過碘酸鈉（748mgnaio4 溶于數(shù)毫升甲醇中，加2 滴6mol/l 鹽酸，再用甲醇稀釋至100ml）。②15g 醋酸銨加0.3ml 冰醋酸，加1ml 乙酰丙酮，用甲醇稀釋到100ml。顯色步驟：點有樣品的濾紙吹干，先噴試劑①，近干后再噴試劑②，室溫放置 2h，紫外燈下照射0.5h，絲氨酸和羥賴氨酸呈黃色斑點，在紫外線下都有熒光。6．羥脯氨酸的顯色試劑：①1g 吲哚醌溶于100ml 乙醇及10ml 冰醋酸。②1g 對二甲胺苯甲醛溶于100ml的丙酮濃鹽酸（9＋1）混合液中。（此試劑不穩(wěn)定，隔數(shù)日后溶液顏色增深發(fā)黑，靈敏度降低，故用時新鮮少量配制。顯色步驟：將待鑒定的溶液點于小方塊紙上，干后先點上試劑①，熱風吹干。這時純羥脯氨酸呈墨綠色，純脯氨酸呈深藍色（極靈敏），對其他氨基酸呈程度不同的紫紅色（不太靈敏）；然后再點上試劑②吹干，如溶液中含有羥脯氨酸即轉(zhuǎn)變?yōu)槊倒寮t色，而其他氨基酸與吲哚醌所生成的顏色則褪去。7．色氨酸的顯色(1)第一種方法試劑：1g 對二甲氨基苯甲醛加90ml 丙酮，10ml 濃鹽酸。新鮮配制。顯色步驟：點有樣品的濾紙干燥后，噴上以上試劑，在室溫下放置幾分鐘后，色氨酸顯藍色或紫紅色。茚三酮顯色后，仍可使用本法。(2)第二種方法：試劑：10ml 35%甲醛加10ml25%鹽酸，20ml 無水乙醇。顯色步驟：點有樣品的濾紙噴上以上試劑后，100℃烘5min，色氨酸在長波長紫外光下呈現(xiàn)熒光（黃-橙-帶綠色）。8．酪氨酸的顯色試劑：①0.1%α-亞硝基β-萘酚的95%乙醇溶液。②10%硝酸水溶液。顯色步驟：點有樣品的濾紙噴上試劑①后，吹干，再噴試劑②，然后在100℃烘3min，酪氨酸或含酪氨酸的多肽在淺灰綠色的背景上顯紅色，0.5h 后轉(zhuǎn)變?yōu)榻奂t色，其后漸退去。靈敏度1～2μg 酪氨酸。茚三酮顯色后，再用此試劑處理，仍能顯色，茚三酮所顯出的紫紅色斑點變成紅色。9．酪氨酸和組氨酸的顯色——pauly 反應試劑：①4.5g 對氨基苯磺酸與45ml 12mol/l 鹽酸共熱溶解，以蒸餾水稀釋至500ml。用時取出30ml，在0℃與等體積的5%亞硝酸鈉水溶液相混合。（室溫放置太長會失效）②10%碳酸鈉水溶液。顯色步驟：點有樣品的濾紙上噴試劑①，片刻后再噴試劑②。組氨酸及含組氨酸的多肽顯桔紅色；酪氨酸及含酪氨酸的多肽顯淺紅色。第六節(jié) 氨基酸定量測定一、氨基酸的一般定量測定（一）甲醛滴定法1．原理氨基酸具有酸性的-cooh 基和堿性的-nh2 基。它們相互作用而使氨基酸成為中性的內(nèi)鹽。當加入甲醛溶液時，-nh2 基與甲醛結(jié)合，從而使其堿性消失。這樣就可以用標準強堿溶液來滴定-cooh 基，并用間接的方法測定氨基酸總量。反應式（有三種不同的推論）如下：2．方法特點及應用此法簡單易行、快速方便，與亞硝酸氮氣容量法分析結(jié)果相近。在發(fā)酵工業(yè)中常用此法測定發(fā)酵液中氨基氮含量的變化，來了解可被微生物利用的氮源的量及利用情況，并以此作為控制發(fā)酵生產(chǎn)的指標之一。脯氨酸與甲醛作用時產(chǎn)生不穩(wěn)定的化合物，使結(jié)果偏低；酪氨酸含有酚羧基，滴定時也會消耗一些堿而致使結(jié)果偏高；溶液中若有銨存在也可與甲醛反應，往往使結(jié)果偏高。3．操作方法吸取含氨基酸約 20mg 的樣品溶液于100ml 容量瓶中，加水至標線，混勻后吸取20.0ml置于200ml 燒杯中，加水60ml，開動磁力攪拌器，用0.05mol/l 氫氧化鈉標準溶液滴定至酸度計指示ph8.2，記錄消耗氫氧化鈉標準溶液ml 數(shù)，供計算總酸含量。加入10.0ml 甲醛溶液，混勻。再用上述氫氧化鈉標準溶液繼續(xù)滴定至ph9.2，記錄消耗氫氧化鈉標準溶液毫升數(shù)。同時取 80ml 蒸餾水置于另一200ml 潔凈燒瓶中，先用氫氧化鈉標準溶液調(diào)至ph8．2，（此時不計堿消耗量），再加入10.0ml 中性甲醛溶液，用0.05mol/l 氫氧化鈉標準溶液滴定至ph9.2，作為試劑空白試驗。4．結(jié)果計算氨基酸態(tài)氮質(zhì)量分數(shù)（%）=式中：v1——樣品稀釋液在加入甲醛后滴定至終點（ph9.2）所消耗氫氧化鈉標準溶液的體積，ml；v2——空白試驗加入甲醛后滴定至終點所消耗的氫氧化鈉標準溶液的體積，ml；c——氫氧化鈉標準溶液的濃度，mol/l；m——測定用樣品溶液相當于樣品的質(zhì)量，g；0.014——氮的毫摩爾質(zhì)量，g/mmol。5．說明①本法準確快速，可用于各類樣品游離氨基酸含量測定。②渾濁和色深樣液可不經(jīng)處理而直接測定。(二)茚三酮比色法1．原理氨基酸在堿性溶液中能與茚三酮作用，生成藍紫色化合物（除脯氨酸外均有此反應），可用吸光光度法測定。該藍紫色化合物的顏色深淺與氨基酸含量成正比，其最大吸收波長為 570nm，故據(jù)此可以測定樣品中氨基酸含量。2．操作方法(1)標準曲線繪制準確吸取 200μg /ml 的氨基酸標準溶液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml（相當于0、100、200、300、400、500、600μg 氨基酸），分別置于25ml 容量瓶或比色管中，各加水補充至容積為4.0ml，然后加入茚三酮溶液（20g/l）和磷酸鹽緩沖溶液（ph 為8.04）各1ml，混合均勻，于水浴上加熱15min，取出迅速冷至室溫，加水至標線，搖勻。靜置15min后，在570nm 波長下，以試劑空白為參比液測定其余各溶液的吸光度a。以氨基酸的微克數(shù)為橫坐標，吸光度a 為縱坐標，繪制標準曲線。(2)樣品測定吸取澄清的樣品溶液 1～4ml，按標準曲線制作步驟，在相同條件下測定吸光度a 值，用測得的a 值在標準曲線上可查得對應的氨基酸微克數(shù)。3．結(jié)果計算氨基酸含量（mg/100g）=式中：c——從標準曲線上查得的氨基酸的質(zhì)量數(shù)，μg；m——測定的樣品溶液相當于樣品的質(zhì)量，g。4．說明及注意事項①通常采用的樣品處理方法為：準確稱取粉碎樣品 5～10g 或吸取樣液樣品5～10ml，置于燒杯中，加入50ml 蒸餾水和5g 左右活性炭，加熱煮沸，過濾，用30～40ml 熱水洗滌活性炭，收集濾液于100ml 容量瓶中，加水至標線，搖勻備測。②茚三酮受陽光、空氣、溫度、濕度等影響而被氧化呈淡紅色或深紅色，使用前須進行純化，具體操作可參閱黃偉坤等編著《食品檢驗與分析》。(三)非水溶液滴定法1．原理氨基酸的非水溶液滴定法是氨基酸在冰醋酸中用高氯酸的標準溶液滴定其含量。根據(jù)酸堿的質(zhì)子學說：一切能給出質(zhì)子的物質(zhì)為酸，能接受質(zhì)子的物質(zhì)為堿；弱堿在酸性溶劑中堿性顯得更強，而弱酸在堿性溶劑中酸性顯得更強，因此本來在水溶液中不能滴定的弱堿或弱酸，如果選擇適當?shù)娜軇┦蛊鋸姸仍黾?，則可以順利地滴定。氨基酸有氨基和羧基，在水中呈現(xiàn)中性，而在冰醋酸中就能接受質(zhì)子顯示出堿性，因此可以用高氯酸等強酸進行滴定。本法適合于氨基酸成品的含量測定。允許測定的范圍是幾十毫克的氨基酸2．測定(1)直接法（適用于能溶解于冰醋酸的氨基酸）：精確稱取氨基酸樣品50mg 左右，溶解于20ml 冰醋酸中，加2 滴甲基紫指示劑，用0.100mol/l 高氯酸標準液滴定（用10ml 體積的微量滴定管），終點為紫色剛消失，呈現(xiàn)藍色。空白管為不含氨基酸的冰醋酸液，滴定至同樣終點顏色。(2)回滴法（適用于不易溶解于冰醋酸而能溶解于高氯酸的氨基酸）：精確稱取氨基酸樣品30～40mg 左右，溶解于5ml0.1mol/l 高氯酸標準溶液中，加2 滴甲基紫指示劑，剩余的酸以醋酸鈉溶液滴定，顏色變化由黃，經(jīng)過綠、藍至初次出現(xiàn)不褪的紫色為終點。3．說明(1)能溶解于冰醋酸的氨基酸，可以用直接法測定的有：丙氨酸、精氨酸、甘氨酸、組氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、纈氨酸、異亮氨酸和蘇氨酸。不易溶解于冰醋酸，但能溶解于高氯酸可以回滴法測定的有：賴氨酸、絲氨酸、胱氨酸和半胱氨酸。(2)谷氨酸和天冬氨酸在高氯酸溶液中也不能溶解，可以將樣品溶解于2ml 甲酸中，再加20ml 冰醋酸，直接用標準的高氯酸溶液滴定。(四)鄰苯二甲醛法(opt 法)1．原理鄰苯二甲醛在 2-巰基乙醇存在下，于堿性溶液中與氨基酸作用產(chǎn)生熒光化合物，最適的激發(fā)光和發(fā)射光波長分別為340 和455nm?？赡墚a(chǎn)物為：各種氨基酸顯現(xiàn)的熒光強度不同，其相對熒光強度由大到小大致順序如下：天門冬氨酸，異亮氨酸，甲硫氨酸，精氨酸，組氨酸，亮氨酸，絲氨酸，纈氨酸，谷氨酸，蘇氨酸，甘氨酸，色氨酸，丙氨酸，苯丙氨酸，賴氨酸，酪氨酸，nh3，脯氨酸，和半胱氨酸。本法可用于測定游離氨基酸的含量。靈敏度較茚三酮法約高 100 倍以上，可測到0.1～1×10－4mol 氨基酸。如用于血清中α-氨基氮的測定，每次血清用量只需5～10μl。與另一種熒光試劑（螢光胺）一樣，空白無熒光，只有與氨基酸結(jié)合才產(chǎn)生熒光。缺點是與脯氨酸不產(chǎn)生熒光，鄰苯二甲醛與半胱氨酸熒光值太低。熒光胺已有用于氨基酸自動分析定量分析，但由于試劑昂貴及個別氨基酸反應不滿意，目前還未普遍應用。(五)三硝基苯磺酸法三硝基苯磺酸（tnbs）是定量測定氨基酸的重要試劑之一。tnbs 在偏堿性的條件下與氨基酸反應，先形成中間絡合物，如下式所示：中間絡合物在光譜上有二個吸收值相近的高峰，分別位于355nm 和420nm 附近。然而溶液一旦酸化，中間絡合物轉(zhuǎn)化成三硝基苯-氨基酸（tnp-氨基酸），420nm 處的吸收值顯著下降，而350nm 附近的吸收峰則移至340nm 處。利用 tnbs 與氨基酸反應的這一特性，可在420nm 處（偏堿性溶液中）或在340nm（偏酸性溶液中）對氨基酸進行定量測定。下表列出各種氨基酸與tnbs 反應后在不同條件下測定的吸光度。在340nm 處，各氨基酸的吸收度大致相近，而在420nm 處的吸光度因氨基酸種類而異；在加入適量so32－時，吸收值升高。本法允許的測定范圍是 0.05～0.4μmol 氨基酸。表 10-3 各種氨基酸與tnbs 反應后在不同條件下測定的吸光度氨基酸種類堿性溶液① 酸性溶液加 so3①取不同含量氨基酸液1ml，加4%nahco3 1ml，0.1%tnbs 1ml，于40℃反應2h，用水補充至4ml，在420nm 處測定。制作氨基酸濃度—吸光度坐標圖，從曲線中求得各氨基酸于1μmol 時的吸光度。②條件同上，但在與tnbs 反應時加0.01mol/l na2so3 1ml，最后總體積也是4ml，同樣在420nm 處測定。③條件同①，但與 tnbs 反應后加1mol/l hcl 1ml 酸化，在340nm 處測定。(六)乙酰丙酮和甲醛熒光法1．原理氨基酸與乙酰丙酮和甲醛反應，生成 n-取代基2,6-二甲基-3,5-二乙?；?,4-二氫吡啶，產(chǎn)生黃-綠色熒光，可用熒光分析法檢測。主要反應如下：乙酰丙酮甲醛氨基酸熒光物質(zhì)2．試劑混合試劑：取1mol/l 乙酸鈉溶液10ml，加入乙酰丙酮溶液0.4ml 和30%甲醛溶液1ml，用水稀釋至30ml。3．測定取氨基酸液 1ml，加入混合試劑1ml，用棉花塞滿試管口，避光于100℃下加熱10min，冷卻，加水2ml，然后測定熒光值。表 10-4 各種氨基酸的發(fā)射波長和檢測范圍化合物（激發(fā)波長405nm）發(fā)射波長（nm）檢測范圍（mg/l）甘氨酸 485 2～10苯丙氨酸 490 8～40絲氨酸 485 5～25半胱氨酸（鹽酸鹽） 500 20～100谷氨酸 485 20～100與標準相比較求出樣品中的氨基酸含量。二、個別氨基酸的定量測定（一）賴氨酸的測定1．原理用銅離子阻礙游離氨基酸的α-氨基,使賴氨酸的ε-氨基可以自由地與1-氟-2,4 二硝基苯(fdnb)反應,生成ε-dnp-賴氨酸。經(jīng)酸化和用二乙基醚提取,在波長390nm 處有吸收峰,從而求出樣品中游離賴氨酸的含量.2．試劑(1)氯化銅液：稱28.0g 無水氯化銅，用水稀釋至1000ml。(2)磷酸三鈉溶液：稱68.5g 無水磷酸鈉,用水稀釋至1000ml。(3)硼酸鹽緩沖液（ph9.1～9.2）：稱54.64g 帶有10 結(jié)晶水的四硼酸鈉，用水稀釋至1000ml 。(4)磷酸銅懸浮液：攪拌情況下，把氯化銅液200ml，緩慢倒入400 ml 的磷酸三鈉溶液中，把懸浮液以2000r/min 速度離心5min ，用硼酸鹽緩沖液再懸浮沉淀物，洗滌離心3 次，把最后的沉淀物懸浮在硼酸鹽緩沖液中，并用緩沖液稀釋至1l。(5)1-氟-2，4 二硝基苯(fdnb)溶液：吸取fdnb10ml 用甲醇稀釋至100ml。(6)賴氨酸-hcl 標準溶液：稱取一定量賴氨酸-hcl，用水配成200mg/l 的工作標準液。(7)100g/l 丙氨酸溶液。3．測定(1)稱取通過40 目篩的均勻試樣1.00g，置于100ml 燒瓶中。另吸取賴氨酸-hcl 標準工作液5ml（相當1mg 賴氨酸-hcl），連同試劑空白同時進行試驗。(2)向各燒瓶中加入25ml 磷酸銅懸浮液，然后再加10%丙氨酸1.0ml,振搖15min。吸取10%fdnb 溶液0.5ml.置于各處理燒瓶中,將燒瓶置沸水中加熱15min。(3)取出燒瓶,立即加入1mol/lhcl 溶液25ml,并不斷搖動使之酸化和分散均勻。(4)燒瓶中的溶液冷卻至室溫,用水稀釋至100ml.取約40ml 懸浮液進行離心。(5)用25ml 二乙基醚提取上清液3 次，除去醚。并將溶液收集于有刻度試管中,于65℃水浴中加熱15min，以除去殘留的醚。并記錄溶液的毫升數(shù)。(6)吸取上述各處理液10ml，分別與95%乙醇溶液10ml 混合，用濾紙過濾。(7)用試劑空白液凋零，測定樣液a390nm，與賴氨酸-hcl 標準液對照，求出樣品中賴氨酸-hcl 的含量。本法在 0～40mg/l 賴氨酸溶液范圍內(nèi)呈良好線性關系。4．說明(1)添加一定量的中性氨基酸如丙氨酸，增加總氨基酸的濃度，有助于賴氨酸-hcl 濃度具有良好的線性關系。(2)用醚提取酸性溶液，可將所有中性或酸性的dnp-氨基酸衍生物除去，并把fdwb的產(chǎn)物破壞，否則這些產(chǎn)物在390nm 處存在干擾。（二）色氨酸的測定1.原理樣品中的蛋白質(zhì)經(jīng)堿水解后，游離的色氨酸與甲醛和含鐵離子的三氯乙酸溶液作用，生成哈爾滿化合物（norharman），具有特征熒光值，可以進行定量測定。2．試劑(1)0.3mmol/l 三氯化鐵-三氯乙酸溶液：稱取三氯化鐵(fecl3?6h2o)41mg，加入10%三氯乙酸溶液溶解并定溶至500ml。(2)2%甲醛：量取甲醛溶液(36%～38%)5.5ml，加水至100ml。(3)色氨酸標準溶液：稱取10mg 色氨酸，用0.1mol/lnaoh 溶液溶解并定容至100ml,置棕色瓶中備用,使用時用水稀釋成1mg/l 的標準溶液.3．測定稱取樣品粉末 100～200mg 于離心管中，加入4ml 乙醚,搖勻后過夜，以3000r/min 速度離心。將乙醚提取液移入試管內(nèi),并用乙醚洗滌殘渣3 次，收集乙醚液于試管中，于40℃水浴除去醚。殘留物中加入6.25mol/l n aoh 4ml，火焰封口，于110℃水解16～24h。水解液用4mol/l hcl 溶液調(diào)節(jié)至ph6～8 后,用水定容至50ml,過濾備用。吸取濾液 0.2ml，加入2%甲醛0.2ml 和0.3mmol/l 三氯化鐵-三氯乙酸混合液2ml，搖勻后于100℃水浴中加熱1h，取出，冷卻后用水定容至10ml。在激發(fā)波長為365nm，發(fā)射波長449nm 條件下，測定樣品的熒光強度，與色氨酸標樣作對照，求出樣品中色氨酸含量。本法在 0～10mg/l 色氨酸溶液范圍內(nèi)呈良好線性關系。